Исследование на хеликобактер пилори (Helicobacter pylori), выявление антигена

Показания к проведению диагностики

Заселение слизистой желудка бактериями Helicobacter pylori сопровождается развитием язвенных поражений, канцерогенных опухолей, хронического гастрита, проявлениями диспепсии, гастроэзофагеального рефлюкса и синдрома раздражённого кишечника.

Бактерия Хеликобактер пилори (H. Pylori) под электронным микроскопом

Иммуноферментный анализ позволяет быстро выявить бактериальную колонизацию слизистой и правильно разработать оптимальную схему терапии или дальнейших обследований.

Анализ Anti-Helicobacter pylori проводится:

• в целях диагностирования:

1. Язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки.
2. Язвы пищевода.
3. Неязвенной диспепсии.
4. Эзофагита.
5. Атрофического гастрита.
6. Рака желудка у близких родственников.
7. Инфицирования хеликобактериозом близких родственников.

• при профилактическом обследовании для выявления пациентов группы риска;
• для оценки динамики лечения;
• при симптомах, вызывающих подозрение на заражение:

1. Невоспринятие белковой пищи.
2. Тяжесть в желудке.
3. Частая рвота неясного генеза, тошнота, упорная изжога, отрыжка.
4. Боли в абдоминальной области (в нижней и верхней части живота), уменьшающиеся после еды.
5. Метеоризм.
6. Потеря веса невыясненного генеза.
7. Запоры и диареи.
8. Кровь в рвотных или каловых массах.

Локализация бактерии Хеликобактер пилори

Как появляется в организме

Хеликобактер пилори называется бактерия грамотрицательного типа, которая заселяет ЖКТ и может существовать там без воздуха. Попадая в организм, бактерия оседает в желудке. Она относится к единственному виду, который не подвергается воздействию желудочного сока.
Передается следующими способами:

• посредством слюны;
• через слизистые выделения;
• с грязью;
• через немытые продукты.

Основной причиной возникновения хеликобактерной инфекции принято считать слабый иммунитет всего организма и локально в органах пищеварения.

Хеликобактер не всегда приводит к разрушительным последствиям. В дремлющем состоянии она неопасна. Здесь большое значение имеет степень выраженности собственных защитных сил организма.

О бактерии

Среди особенностей Хеликобактер пилори можно выделить:

• она устойчива к желудочному соку и соляной кислоте, что обусловлено ее быстрым передвижением и выработке аммиака;
• при проникновении в слизистые ткани желудка начинает свое разрушительное воздействие, приводящее к образованию язв или очагов воспаления;
• при размножении происходит интоксикация организма, что ведет к воспалению слизистой желудка.

Что из себя представляет анализ крови на определение уровня антител

ИФА заключается в исследовании сыворотки крови и определении титров антител (концентрации), наличие которых является показателем инфицированности человека хеликобактериозом. Они образуются в ответ на внедрение генетически чуждых белков, в этом случае – на микроорганизм Helicobacter pylori.

Образование антител – часть природных механизмов защиты, нацеленной на ликвидацию патогенов. Если в крови при исследовании обнаруживают антитела, это означает, что иммунная система среагировала на присутствие в организме вредоносного микроорганизма.

Более точные данные получают при проведении исследования титров трёх иммуноглобулинов A, M, G:

• антитела класса IgG к Helicobacter pylori работают маркером, подтверждающим наличие в организме бактерии. Иммуноглобулины этого типа обнаруживаются с третьей – четвёртой недели после заражения. Но высокие показатели титров IgG удерживаются месяцами уже после выведения возбудителя;
• антитела IgМ – показатель раннего инфицирования. Они, как и IgА, обнаруживаются достаточно редко. Их наличие сигнализирует о начавшейся ранней инфекции и о выраженном воспалительном процессе на слизистой.

Что такое Helicobacter pylori

Спиралевидный организм вырабатывает специальную пленку, которая защищает ее от воздействия иммунного ответа и антибактериальных средств. В неблагоприятных внешних условиях выживает, благодаря возможности трансформироваться в шаровидную кокковую форму. С помощью жгутиков Helicobacter pylori перемещается в густой слизи на поверхности желудка и быстро заселяет антрум и пилорический отдел.

Липополисахаридные комплексы и белковые компоненты повышают адгезию микробной клетки к слизистой стенке желудка, а ферменты расщепляют слизь, вызывая воспалительную реакцию. Дополнительным повреждающим фактором является продукция бактерией уреазы. В результате химической реакции образуется аммиак, который повышает уровень рН и разрушает эпителиальный слой органа.

Как отвечает иммунная система на присутствие Helicobacter pylori

Присутствие чужеродного агента в организме вызывает реакцию специфического и гуморального иммунитета. Адгезия патогенных микроорганизмов приводит к усиленному делению защитных клеток, которые локализуются в зоне воспаления. Степень накопления нейтрофилов, макрофагов и других элементов определяет выраженность патологического процесса с дальнейшим формированием различных осложнений. Другое звено определяет выработку антител, которые указывают на длительность заболевания и степень поражения.

Преимущества и недостатки

Преимущества ИФА на наличие хеликобактер пилори

К плюсам относят следующее:

• высокая эффективность (более 92%) исследования; IgG выявляют в 95–100% случаев заражения хеликобактер пилори, IgA – в 67–82%, IgM – в 18–20%;
• обнаружение патогена на ранних сроках заражения;
• возможность отслеживать отклонения от нормы и динамику заболевания, сравнивая титры иммуноглобулинов в разные периоды;
• доступность анализа.

Анализ на концентрацию антител актуален, если не планируется выполнение эндоскопии.

Исследование на IgG применяют для выявления первичного инфицирования у пациента с начальными симптомами нарушения функции органов пищеварения. В этом случае высокое содержание IgG даёт повод заподозрить развитие активной инфекции.

Положительный результат теста у больного (с симптоматикой или без неё), не получавшего до этого никакого лечения, также укажет на инфицирование хеликобактериозом.

Недостатки метода

ИФА способен показать иммунный ответ на инфекцию, но не диагностировать наличие самой бактерии.

Антитела IgG обнаруживаются только через 20–30 дней после внедрения в организм Helicobacter pylori, поскольку иммунный ответ срабатывает с некоторой задержкой. Отсюда проистекают следующие недостатки иммуноферментного анализа крови:

1. Вероятность ложного отрицательного результата анализа у заражённых больных. Это происходит, если микроб впервые проник в организм, но система защиты пока не отреагировала на экспансию патогенов выработкой антител.
2. Ложный положительный результат у вылечившихся пациентов. Антитела IgG сохраняют присутствие в крови уже после полного уничтожения микроорганизма и при отсутствии гастрологических проявлений. Это особенно показательно у людей преклонного возраста. Значит – результат ИФА на хеликобактер может быть реакцией на давно вылеченную инфекцию.
3. Вероятность ложного положительного результата, если до анализа уже проводилось лечение антибиотиками. Или антибактериальные препараты, действующие против инфекции, применялись в других целях. Концентрация IgG остаётся повышенной до полутора лет у 50% пациентов, вылечившихся от хеликобактериоза. Поэтому при положительном результате анализа у больного, ранее принимавшего антибиотики, сложно отличить состояние инфекционного процесса в действии и инфекцию подавленную и слабую, что требует дополнительных исследований.
4. Малые титры обнаруживаются при использовании определённых цитостатических средств.
5. Сложность проведения точной дифференциальной диагностики между пассивным заселением полости желудка патогенами H. pylori и заболеванием в острой форме. Это невозможно без учёта других данных.

Недостатки исследования компенсирует суммарный анализ антител IgG, IgM и IgA.

При развитии хеликобактериоза концентрация иммуноглобулина IgG в сыворотке крови зависит от уровня активности заболевания и снижается после ликвидации патогенной бактериальной среды. В отличие от иммуноглобулина типа G антитела A и М выявляются в крови гораздо раньше после заражения. Кроме того, IgА поддаётся обнаружению в желудочном соке и слюне заражённого хеликобактериозом, что является симптомом заражения самой высокой степени активности.

Тактика определения бактерии хеликобактер с помощью анализа кала

Назначением конкретного анализа на хеликобактериоз занимается врач. Специалист учитывает индивидуальную клиническую картину состояния здоровья пациента. Сдать анализы на хеликтобактериоз можно самостоятельно, если возникают подозрения на функциональное отклонение пищеварительного тракта.

Молекулярная диагностика

При молекулярном анализе выявляется специфическая ДНК бактерии. Код дублируется на специальном аппарате. При достижении бактерией нужного размера, ее сравнивают с этанолом. Если части ДНК совпадают с оригиналом, то результат теста положительный (хеликтобактериоз выявлен). Методика отличается высокой степенью информативности.

Культуральный анализ

Бактериальный посев (или культуральный анализ) относится к категории микробиологических методов исследований. В процессе поведения процедуры биологический материал помещается в среду, которая является максимально благоприятной для размножения патогенных микроорганизмов. Через неделю каловые массы изучаются с помощью микроскопа.

Для идентификации хеликобактер пилори учитываются окраска бактерий и их способности вступать в определенные реакции.

Особенности методики:

• процедура позволяет выявить патологический антиген;
• в процессе изучения биологического материала проводится тест на чувствительность к антибактериальным препаратам;
• результаты исследования позволяют подобрать максимально эффективную схему терапии.

Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом

Главной целью проведения иммунологических тестов при выявлении хеликобактер пилори является определение комплексов антиген + антитело. Для исследования используются помеченные антитела. Вступая в реакцию с калом, такие вещества подвергаются определенным изменениям. Антитела способны определить наличие в каловых массах не только патогенные бактерии, но и их части, а также продукты жизнедеятельности.

Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики

ПЦР-диагностика имеет ряд достоинств и недостатков. Некоторые виды патогенных бактерий можно выявить только с помощью данной методики (например, цитотоксичные типы микроорганизмов). Сбор материала для анализа не подразумевает причинение боли или дискомфорта пациенту. Процедура показывает максимально достоверные результаты.

Преимущества методики:

• процедура позволяет выявить различные штаммы патогенных бактерий;
• метод отличается высокой степенью чувствительности;
• анализ безопасен для пациента (для сбора материала не применяются медицинские инструменты);
• неинвазивность и простота процесса забора биологического материала;
• высокая степень специфичности теста;
• метод позволяет определить не только спиралевидные, но и кокковые типы бактерий.

Высокая степень чувствительности теста является его одновременным достоинством и недостатком. Анализ с точностью определяет наличие бактерий, но при загрязнениях биологического материала или тары, результаты процедуры могут быть ложноположительными.

Для исключения ложных показателей следует соблюдать все правила сбора каловых масс для проведения их исследования.

Другие недостатки:

• относительно высокая цена процедуры;
• отсутствие возможности определить чувствительность бактерии к антибактериальным препаратам;
• более низкий показатель чувствительности в сравнении с процедурой исследования биоптата слизистой оболочки желудка.

Подготовка к проведению теста

Подготовка включает в себя следующее:

• накануне исследования ИФА запрещено употреблять алкоголь, жирную пищу;
• за день исключают физические нагрузки;
• сдать кровь необходимо до завтрака, утром разрешается пить воду;
• интервал между последним приёмом пищи и тестированием – не менее 8–10 часов.
• сдавать анализ нужно до начала применения лекарств (по возможности) или не раньше 8–14 дней после завершения терапии. Если лечение проводится, то в направлении на анализ указывается перечень принимаемых лекарственных препаратов и дозы.

Проведение исследования, стоимость

Материалом для анализа является сыворотка крови, которую берут посредством венепункции. Собранный биоматериал сливают в пробирку, где имеется специальный гель-коагулянт, который делает возможным выделить плазму (сыворотку крови) для исследования.

Осложнения при процедуре забора крови на исследование сведены к минимуму. В случаях образования синяка в месте прокола вены используют сухое тепло для быстрого рассасывания гематомы.

В разных лабораториях страны стоимость исследования колеблется в пределах от 340 на иммуноглобулин одного типа до 900 рублей на суммарный анализ.

Получить лабораторный ответ по иммуноглобулину G можно спустя самое долгое 24 часа после взятия крови. Изучение IgA продолжается дольше. Результат получают через 8 суток.

Забор крови для ИФА (иммуноферментного анализа)

Расшифровка результатов, показатель нормы

Существует количественное и качественное определение иммуноглобулинов G, A и М к Helicobacter pylori в плазме крови.

1. Качественный показатель говорит о наличии и отсутствии антител без количественной оценки. В норме, если пациент не болен, антитела отсутствуют. В этом случае в лабораторной выписке значится, что анализ на антитела к Н. Pylori отрицательный.
2. Показатели количества IgG, IgA и IgМ базируются на референтных (пороговых) значениях, означающих норму, с которыми сравнивают полученные данные.

Референтные нормы в лабораториях различаются по цифровым показателям и оцениваются в разных единицах. Однако на бланке результатов анализа проставляют цифры для «нормы» и отклонения от референтных значений. При расшифровке нужно учитывать, какие титры иммуноглобулинов: ниже порогового показателя означают отрицательный результат теста, выше – положительный.

Таблица №1: Референтные значения иммуноглобулинов в единицах измерения Ед./мл

Много лабораторий отмечают показатели, при которых результат анализа ИФА расценивается как «сомнительный». Это причина для повторения сдачи анализа через 14–20 дней для уточнения диагноза.

Таблица №2: Интерпретация теста на титры иммуноглобулина G к Helicobacter pylori

Уточнённый диагноз устанавливается после совокупной оценки результатов анализа крови ИФА на хеликобактер пилори с изучением показателей наличия трёх классов антител к данной бактерии.

Структура антител — иммуноглобулинов A, G, M против хилорибактер пилори

Таблица №3: Расшифровка титров антител анализа ИФА в единицах измерения ИФЕ

Если иммуноглобулин IgA не обнаружен, но болезненные ощущения не стихают даже при отрицательном результате теста на хеликобактер пилори, исследование делают повторно.

Повышенные титры трёх классов иммуноглобулинов G, A и М свидетельствуют об агрессивности инфекционного процесса.

Понижение концентрации IgG до 2 % в течение полугода говорит об уничтожении H. pylori. Но если титры не снижаются, это ещё не означает, что лечение плохое. Отсутствие антител IgG при проведении повторного теста свидетельствует о результативности терапии и подавлении бактерии. Проводить анализ желательно и после завершения терапии, на 10–12 неделе. В таком случае титр иммуноглобулинов G к хеликобактер пилори при подавлении инфекции снижается на 50% и более.

При подавлении патогенной бактерии наблюдается тенденция к явному снижению остроты воспалительного процесса в желудочной полости.

Если желудочно-кишечные симптомы при выявлении H. pylori отсутствуют – это является показателем того, что желудок заселен болезнетворными микробами, но развития хеликобактериоза не происходит.

Как определить наличие хеликобактерии в желудке

Глазом увидеть такой мельчайший организм длиной всего 2-3 мкм не представляется возможным, как и провести диагностику в домашних условиях.

Пациент может только предположить наличие гастрита по соответствующим симптомам: боли в эпигастрии после еды, тяжесть и дискомфорт в желудке, изжога, отрыжка воздухом или кислым, металлический привкус во рту. Эти признаки повышения кислотности очень часто сопровождают гастриты, ассоциированные с патогенным микробом.

Но достоверно выявить, поселилась ли бактерия хеликобактер пилори в организме или нет, можно лишь в диагностическом отделении амбулаторно-поликлинического звена, стационара или лаборатории.

Обнаружение патогена в мазках с участка внутренней стенки желудка или культивирование микроорганизма на питательных средах.

Обнаружение антител в крови, антигенов микробов в кале.

Выявление Н. руlori под микроскопом при покрытии образца исследования специальными красителями.

Методы полимеразно-цепной реакции.

Уреазный тест, дыхательный тест.

Все вышеперечисленные методы можно классифицировать на две большие группы:

1. Инвазивные. Способы диагностики, основанные на проведении эндоскопического исследования – ФГДС, со взятием биоптата. Участок внутренней стенки желудка затем можно подвергнуть цитологическому, культуральному исследованию, провести уреазный тест.
2. Неинвазивные. Другие способы обнаружения инфекции, при которых ФГДС не проводится.